細胞凍存盒的實驗步驟，您都知道嗎？

　　什么是細胞凍存？

　　細胞長勢良好，供大于求時，就可以考慮把細胞凍存起來，以后再用。當溫度低于-70℃時，細胞內的酶活性全部停止，代謝活動停止，故可以達到長期保存的目的。隨著溫度降低，細胞內外的水分都會結晶，所形成的冰晶會造成細胞膜和細胞器的破壞，從而引起細胞死亡，特別是-20-0℃的階段，冰晶呈針狀，及容易引發細胞損傷。

　　細胞凍存盒的基本原則是緩慢冷凍，實驗證明這樣可以大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。

　　細胞凍存盒的實驗步驟：

　　1.配制含10%DMSO、20%小牛血清的凍存培養液4mL。

　　2.取出生長良好的細胞。

　　3.吸除舊的培養液：拿出吸管（要拿吸管的上端），插入與抽濾瓶相連的橡膠管中，在酒精燈外焰灼燒滅菌，細胞培養瓶傾斜將吸管插入瓶底部一角，吸出舊的培養液，將用后的吸管棄于廢棄缸里。

　　4.消化：拿出5mL移液管，插入電槍中，酒精燈過火灼燒，吸取2mL0.25%胰酶，混勻，放于37℃孵箱中消化5-6min。取下用后的移液管。

　　5.中和：從孵箱中拿出培養瓶，顯微鏡下觀察細胞是否被*消化下來，5mL滅菌后移液管加入3mL培養液終止消化。

　　6.離心收集細胞：配平后離心200×g，3min。將新培養液加入新培養瓶中，2mL／瓶（培養瓶底面積為25cm2）。

　　7.分裝凍存：將細胞分裝入凍存管中，每管1mL。

　　8.在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；

　　9.凍存：細胞凍存盒，里面有異丙醇，直接放入-80過夜，凍存盒自動緩慢降溫。然后-196℃液氮保存。